熒光顯微鏡標本制作材料及方法

熒光顯微鏡標本制作材料及方法

熒光樣本制作所需材料

(一)載玻片

滑板厚度應在0.8毫米至1.2毫米之間。工業(yè)視頻顯微鏡將傳統(tǒng)的顯微鏡與攝像系統(tǒng),顯示器或者電腦相結合,達到對被測物體的放大觀察的目的。金相顯微鏡電腦型金相顯微鏡或是數(shù)碼金相顯微鏡是將光學顯微鏡技術、光電轉換技術、計算機圖像處理技術完美地結合在一起而開發(fā)研制成的高科技產品，可以在計算機上很方便地觀察金相圖像，從而對金相圖譜進行分析，評級等以及對圖片進行輸出、打印。體視顯微鏡指從不同角度觀察物體,使雙眼引起立體感覺的雙目顯微鏡。過厚的斜坡一方面可以吸收*多的光，另一方面也不能使激發(fā)光聚集在試樣上。切片必須光滑，厚度均勻，沒有明顯的自體熒光。有時使用石英玻璃載玻片。

(二)蓋玻片

蓋玻片約0.17mm厚，光滑。為了增強激發(fā)光，也可以使用干涉蓋玻片。這是一種特殊的蓋玻片，表面涂有幾層對不同波長的光有不同干涉作用的物質(如氟化鎂)。能使熒光順利通過，反射激發(fā)光，激發(fā)標本。

(三)標本

組織切片或其他標本不能太厚，如太厚激發(fā)中國光大這一部分企業(yè)消耗在標本下部，而物鏡直接可以觀察到的上部不充分問題激發(fā)。另外，細胞重迭或雜質掩蓋，影響分析判斷。

(四)封裱劑

甘油通常用作密封劑，它必須無自發(fā)熒光，無色透明，熒光亮度在pH8.5～9.5范圍內明亮，不易迅速褪色。 因此，通常使用pH 9.0-9.5的甘油和0.5mol/l碳酸鹽緩沖液的相等混合物作為密封劑。

(五)鏡油

在金相熒光顯微鏡和油鏡觀察樣品時，需要使用鏡油，請使用專用非熒光鏡油，或使用上述甘油，也可以使用液體石蠟，但折射率低，對圖像質量影響不大。

熒光標本的制作方法：

樣品必須石蠟包埋，然后用蘇木精鐵礬染色，普通工業(yè)顯微鏡也可用熒光 DAPI 染色觀察,

石蠟切片的過程：

1. 取材：刀片要求鋒利而薄,組織厚度約2—3mm, 大小1.5×1.5×0.2～0.3cm為宜. 取材時間越快越好.

2. 固定: 組織可以取下后應立即將其放入10%福爾馬林(相當于4%甲醛)固定.

注: (1)固定劑的體積應為組織塊體積的40倍。

固定時間：固定時間與所用固定液的類型、組織塊的大小、溫度等有關，一般為3h-24h。

(3)固定工作溫度：大多企業(yè)可在室溫以及固定, 在低溫(4℃)時間應延長.

(4)固定容器:固定容器要大一些。

3. 漂洗：流水沖洗2—10h.

4. 脫水: 從低濃度酒精到高濃度酒精.

70%（分鐘）→ 80%（60-120'）→ 90%（60-120'）→ 95%（60-120'）→ 95%（60-120'）→ ****（60-120'）→ ****（60-120'）。

5.透明: 組織塊脫水后，必須通過溶劑與酒精混合溶解石蠟，然后石蠟進入組織塊。常用的二甲苯，一般浸泡30米即可。

6.浸蠟:將透明后的組織浸入融化的石蠟中的過程稱為浸蠟。一般需要蘸2-3次，總時間3-4小時。浸蠟用石蠟的熔點為52-56℃。

7. 包埋: 先將熔化的石蠟溶液倒入其中包埋框再用一個加熱的鑷子將組織塊放入.